一. 由氧化作用导致

蛋白质的氧化作用主要发生在蛋白质的，半胱氨酸，甲硫氨酸，色氨酸等氨基酸残基上，是蛋白失活或聚集现象的重要影响因素。`

解决方案：一般为了提高蛋白质长期保存过程中的抗氧化能力，可以在保存蛋白质的缓冲液中加入一些还原剂。

• 1）DTT，DTT( 二硫苏糖醇)是实验室常用的还原试剂，常被用于蛋白质保存以及蛋白二硫键的还原，DTT能够维持单巯醇试剂处于还原状态，并且能够定量还原二硫键。同时DTT不会形成二硫化物。

• 2）2-巯基乙醇，用于二硫键的还原，可以作为生物学实验中的抗氧化剂。它被广泛使用的原因是它的羟基使它能够溶解于水中，并且降低它的挥发性。

• 3）TCEP（三(2-羰基乙基）磷盐酸盐），TCEP不易挥发，无特殊气味，在水中溶解度高达310g/L，并且不易被空气氧化。与DTT相比，在pH大于7.5条件下，TCEP更加稳定，且pH小于8时，TCEP还原性更强。

二. 蛋白水解导致

蛋白质保存期间的蛋白水解也是引起蛋白质不稳定的重要因素。目前的很多人认为是因为蛋白纯化过程中无法完全去除其中的蛋白水解酶所致。

具体原因为：与丝氨酸/天冬酰胺残基降解相关的第三个反应是天冬酰胺相关肽键水解（也称为蛋白酶水解）。即使没有天冬酰胺存在，抗体中也观察到了肽链的水解。这种反应最常发生在抗体的铰链区，因此被称为铰链区水解。它也可以发生在 CH2-CH3 之间，通常在在四种不同的IgG1中也发生，因此该反应很可能是由多肽链的柔韧性影响的。经研究水解反应在肽键上不具有特异性，而是在一组狭窄的残基范围内。在这种情况下，水解仅限于重链序列丝氨酸-半胱氨酸-天冬酰胺-赖氨酸-苏氨酸-组氨酸-苏氨酸。虽然链的柔韧性似乎很重要，但Fab区域构象的不稳定会导致铰链区水解速率加快。铰链区水解的pH速率曲线呈“V”形，在pH约为6时有最低值，高于6时，速率随pH线性增加。
除了这些更常见的降解过程外，其他功能团也对水解敏感，例如，色氨酸侧链会发生水解。主要降解产物被称为犬尿氨酸，其荧光波长比色氨酸本身长得多（450nm）。犬尿氨酸和相关物质也可以在氧化分解色氨酸时形成。。

解决方案：因此我们需要在保存蛋白质的缓冲液中加入一些蛋白酶抑制剂。常用的蛋白质酶抑制剂如下：

在蛋白质长期存放过程中，微生物生长也有可能导至蛋白质水解失活，因此需要加入防腐剂，如叠氮化钠、邻乙汞硫基苯酸钠、ProClin 系列以及抗生素等。

三. 由蛋白浓度导致

低浓度的蛋白质在储存过程中的稳定性差的原因可能有以下两点：

• 1）在低蛋白浓度下，多亚基蛋白，含有辅助因子的蛋白具有解离的趋势死。
• 2）蛋白质容易不可逆地吸附到容器管壁上，如塑料或玻璃等材质上。其中高吸附的材质或者是粘性较强的蛋白质，其吸附程度更加明显。

解决方案：可以通过以下方法进行缓解

• 1）在缓冲液中加入适量的表面活性剂Tween 20，Tween 20细胞毒性更小，且紫外吸收更弱，在应用上可能更为广泛一些。但加入浓度太高也会导致蛋白质聚集体的产生。

• 2）在缓冲液中加入适量的表面活性剂Triton X-100。

加入表面活性剂后可以降低蛋白在界面上的吸附作用，环节因吸附导致的溶液中蛋白含量的差异。